新型冠狀病毒（2019-nCoV）檢測方法介紹-蛋白檢測

冠狀病毒外形呈球形，在病毒包膜外有明顯的棒狀膜外粒子，膜外粒子形狀酷似中世紀歐洲帝王王冠的結(jié)構(gòu)，因此得名“冠狀病毒”。冠狀病毒主要由核酸基因（RNA）以及有基因編碼的外殼蛋白兩部分組成。外殼蛋白包括棘突蛋白（S蛋白）、包膜蛋白（E蛋白）、膜蛋白（M蛋白）以及核衣殼蛋白（N蛋白）組成。其結(jié)構(gòu)圖如下：

2019新型病毒是目前發(fā)現(xiàn)的第七種感染人體的冠狀病毒。通過對新冠病毒編碼的蛋白進行檢測，可判定患者是否被感染。蛋白檢測主要依賴于ELISA技術(shù)平臺及免疫層析技術(shù)平臺。

ELISA檢測平臺

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)）是利用酶的高效催化放大作用與特異性抗原-抗體反應相結(jié)合而建立的一種標記免疫技術(shù)。根據(jù)檢測原理的不同可分為直接法、間接法、雙抗夾心法、競爭法四種。2019-nCoV蛋白使用雙抗夾心法進行檢測，其實驗流程為：

1. 將配對抗體中的一株抗體固定至固相載體表面，并保持其免疫活性；
2. 將另一株抗體與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標抗體，此酶標抗體既保留其免疫活性，又保留其酶活性；
3. 測定時將待測樣本固相載體孵育，形成抗原-抗體復合物，再通過洗滌將未與固相載體結(jié)合的物質(zhì)分開；
4. 加入酶標抗體，通過反應結(jié)合到固相載體上（此時固相載體上為“抗體-抗原-酶標抗體”復合物，即雙抗夾心）；
5. 加入酶反應底物，底物被酶催化后顯色，根據(jù)顏色深淺可以定性分析是否含有2019-nCoV抗原。

免疫層析技術(shù)

免疫層析技術(shù)是20世紀90年代初在免疫滲濾技術(shù)的基礎上建立的一種簡易快速的免疫學檢測技術(shù)。該技術(shù)利用了抗原抗體特異性結(jié)合的特性，首先將能夠同時結(jié)合同一抗原的一對抗體分別固定于免疫層析檢測試紙條的檢測線（T線）與結(jié)合墊上，結(jié)合墊上的抗體帶有顯色標記（熒光標記或膠體金標記）。在試紙條滴樣處滴加樣品，樣品會向試紙條另一端流動，當流動至結(jié)合墊，樣品中的抗原會和結(jié)合墊上的標記抗體結(jié)合，形成“標記抗體-抗原”復合物，當樣品流動至檢測線時，抗原會被T線上的抗體捕獲，形成“標記抗體-抗原-捕獲抗體”復合物，隨著T線上捕獲抗原的不斷增加，T線會出現(xiàn)愈加明顯的顏色變化。如果T線出現(xiàn)顏色變化，則說明待測樣本中含有待測抗原。

常見檢測平臺

• 1. 膠體金平臺
• 2. 免疫熒光平臺

ELISA檢測與免疫層析檢測方法對比

ELISA檢測具有技術(shù)可靠、試劑方便易得、靈敏度更高等優(yōu)點，免疫層析檢測具有測定更為方便、快速、不需要儀器，隨到隨測等優(yōu)點。

參考文獻

[1]. Xintian Xu.Evolution of the novel coronavirus from the ongoing Wuhan outbreak and modeling of its spike protein for risk of human transmission.SCIENCE CHINA Life Sciences.2020
[2]. Buss H , Chan T P , Sluis K B , et al. Protein Carbonyl Measurement by a Sensitive ELISA Method[J]. Free Radical Biology and Medicine, 1997, 23(3):361-366.
[3]. 隋菊英. 膠體金免疫層析法和ELISA法在HBsAg檢測中的方法學評價[J]. 中國醫(yī)藥導報(36):81-82.

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