體外診斷試劑性能評(píng)估基本內(nèi)容

體外診斷試劑是疾病診斷與治療的重要輔助手段。一個(gè)新開(kāi)發(fā)的試劑能否真正面市，除了進(jìn)行反應(yīng)模式和體系等優(yōu)化外，合理的性能分析與評(píng)估，是必經(jīng)的程序，也是質(zhì)量保障的基礎(chǔ)。通常，體外診斷試劑產(chǎn)品性能評(píng)估包括檢測(cè)限、線性范圍、可報(bào)告范圍，準(zhǔn)確度，精密度，干擾實(shí)驗(yàn)，穩(wěn)定性，參考區(qū)間。

1.檢測(cè)限

檢測(cè)限是指檢測(cè)方法可檢測(cè)出的最低被檢測(cè)量濃度，也稱為分析靈敏度。

分析靈敏度：一般用95％可信限計(jì)算：重復(fù)測(cè)定空白樣本20次，計(jì)算20次反應(yīng)測(cè)得的均值（X）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），以X+2SD（夾心法）或X-2SD（競(jìng)爭(zhēng)法）計(jì)算出相應(yīng)的濃度，即為體外診斷試劑的分析靈敏度，也是注冊(cè)資料所需提供的內(nèi)容。

功能靈敏度：將低值樣本倍比稀釋后重復(fù)測(cè)定10次以上，計(jì)算每個(gè)低值樣本檢測(cè)信號(hào)的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)（CV），選擇CV大于 20％時(shí)所對(duì)應(yīng)的低值樣本平均濃度，這就是體外診斷試劑的功能靈敏度。

2.線性范圍

線性范圍是指檢測(cè)系統(tǒng)最終輸出值（濃度或活性）與被分析物的濃度成正比的范圍。

建立一種定量測(cè)定方法的線性范圍，需在預(yù)期測(cè)定范圍內(nèi)選擇7-11個(gè)濃度水平。準(zhǔn)備足量的高值（H）樣本和低值（L）樣本，經(jīng)不同比例混合配制成中間濃度樣本，比例關(guān)系可按等間距或其他確定的比例。其中，有幾個(gè)重要的濃度水平需要考慮：1）最低分析濃度或線性范圍下限；2）不同的醫(yī)學(xué)決定水平值；3）最高分析濃度或線性范圍上限。

3.可報(bào)告范圍

可報(bào)告范圍是指對(duì)檢測(cè)有意義的待測(cè)物濃度范圍。

可報(bào)告范圍低限：以方法性能指示的CV值為可接受界值，由數(shù)據(jù)中選取CV值等于或小于可接受界值的最低濃度水平作為可報(bào)告范圍低限。

可報(bào)告范圍高限：當(dāng)測(cè)定值超出線性范圍上限時(shí)，此測(cè)定值應(yīng)視為不準(zhǔn)確值，需要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋。由于基質(zhì)效應(yīng)的影響，任何標(biāo)本并非可以做無(wú)止境的稀釋。也就是說(shuō)，每一個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目有其最大稀釋倍數(shù)。這個(gè)最大稀釋倍數(shù)與線性范圍上限的乘積即為可報(bào)告范圍高限。

4.準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度是指檢測(cè)結(jié)果與被測(cè)量真值之間的一致程度。

回收實(shí)驗(yàn)：實(shí)質(zhì)上是實(shí)驗(yàn)測(cè)得的加入的標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與理論計(jì)算而來(lái)的加入標(biāo)準(zhǔn)物的濃度的比值。

方法學(xué)比對(duì)：對(duì)于比較、比對(duì)方法，采用符合生產(chǎn)廠家要求的實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)行方法，或采用工人的參考方法。比對(duì)方法應(yīng)具備以上條件：1）具有比實(shí)驗(yàn)樣品方法更好的精密度；2）沒(méi)有已知的干擾物；3）同實(shí)驗(yàn)樣品方法具有相同單位。

5.精密度

精密度通常是指在規(guī)定條件下相互獨(dú)立的測(cè)試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得到的，是通過(guò)測(cè)量不精密度的數(shù)字形式表示的，例如：偏差、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)（CV）。

只評(píng)估批內(nèi)精密度：批內(nèi)精密度的測(cè)定應(yīng)使用同一種類、同一批號(hào)的試劑盒校準(zhǔn)物（如可能，只進(jìn)行一次校準(zhǔn)），在一批內(nèi)對(duì)樣本進(jìn)行至少20次重復(fù)測(cè)定。

同時(shí)評(píng)估批內(nèi)和批間精密度：每天做2個(gè)批次的測(cè)試，每批測(cè)試對(duì)同一樣品做雙份測(cè)量，工作20d。那么，評(píng)估結(jié)束時(shí)有40對(duì)數(shù)據(jù)，即80個(gè)測(cè)試結(jié)果。從同一樣本的雙份測(cè)量結(jié)果即40個(gè)數(shù)據(jù)可求出批內(nèi)精密度；從兩批80個(gè)數(shù)據(jù)可求出批間精密度。

6.干擾實(shí)驗(yàn)

干擾實(shí)驗(yàn)主要是考慮非檢測(cè)物對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，通過(guò)對(duì)樣本中添加不同種類、不同濃度的干擾物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，以判斷在產(chǎn)品性能指標(biāo)范圍內(nèi)可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。血液樣本一般須考慮膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等常見(jiàn)干擾物質(zhì)及溶血等因素；檢測(cè)樣本為血漿的試劑，還應(yīng)充分考慮不同抗凝劑對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。尿液樣本則一般考慮pH值、血尿、蛋白尿等的影響。

7.穩(wěn)定性

穩(wěn)定性是體外診斷試劑隨時(shí)間推移保持特性一致性的能力。

效期穩(wěn)定性研究時(shí)間設(shè)定一般原則是“第一年內(nèi)每隔三個(gè)月檢測(cè)一次，第二年內(nèi)每隔六個(gè)月檢測(cè)一次，第三年開(kāi)始可以每年檢測(cè)一次。如果有效期為一年或一年以內(nèi)，則長(zhǎng)期穩(wěn)定性應(yīng)為前三個(gè)月每月檢測(cè)一次，以后每三個(gè)月一次”。

加速穩(wěn)定性研究方法為：將三個(gè)批號(hào)的試劑盒放入37?C恒溫培養(yǎng)箱中，分別于第0、3、6、10天各取原裝未開(kāi)封試劑，參考產(chǎn)品技術(shù)要求中相關(guān)檢測(cè)方法對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，各指標(biāo)均應(yīng)符合擬定的技術(shù)要求中各性能指標(biāo)要求。

運(yùn)輸穩(wěn)定性評(píng)價(jià)是基于對(duì)試劑實(shí)際運(yùn)輸條件的了解（如運(yùn)輸時(shí)間、預(yù)計(jì)溫度和濕度）來(lái)模擬運(yùn)輸條件存放產(chǎn)品從而評(píng)價(jià)產(chǎn)品的穩(wěn)定性。在運(yùn)輸穩(wěn)定性考察中主要考慮的條件有：極端溫度條件，溫度循環(huán)條件，沖擊與振蕩，壓力與濕度等。生產(chǎn)企業(yè)可以通過(guò)實(shí)地追蹤記錄體外診斷試劑產(chǎn)品的物流運(yùn)輸情況為模擬運(yùn)輸模式的確定提供參考。

開(kāi)瓶穩(wěn)定性是考察試劑在正常使用條件下，外界因素對(duì)試劑性能指標(biāo)的影響。由于試劑、試紙條等在開(kāi)封后會(huì) 與空氣接觸產(chǎn)生氧化、降解等反應(yīng)，部分試劑在開(kāi)瓶上機(jī)后的外界條件與原儲(chǔ)存條件差別很大，以及部分試劑還會(huì)存在使用者二次配制等情況，所以在制定開(kāi)封穩(wěn)定性研究方法時(shí)應(yīng)充分考慮到各種環(huán)境因素。

8.參考區(qū)間

參考區(qū)間即正常人群的檢測(cè)值范圍，在研究過(guò)程中，企業(yè)應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明所采用樣本來(lái)源及試驗(yàn)方法，并明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)文獻(xiàn)資料等判斷檢測(cè)結(jié)果在不同性別、年齡、樣本類型之問(wèn)是否有顯著性差異，如有須分別進(jìn)行研究，同時(shí)所研究樣本例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，建議采用至少120例以上樣本進(jìn)行研究(可滿足90％置信限)，198例樣本則可滿足99％的置信限，在檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析過(guò)程中，結(jié)合不同產(chǎn)品的臨床意義確定最終的參考區(qū)間，在研究過(guò)程中由于所選樣本受地區(qū)或人種限制，因此在臨床應(yīng)用時(shí)建議各臨床實(shí)驗(yàn)室建立參考區(qū)間。