體外診斷試劑性能指標(biāo)--穩(wěn)定性
穩(wěn)定性是體外診斷試劑隨時(shí)間推移保持特性一致性的能力，是試劑必須具有的基本屬性，是確保試劑使用過(guò)程中有效性的重要指標(biāo)，也是生產(chǎn)商的職責(zé)。
在2014年9月5日，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布了《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告（2014年第44號(hào)）》，公告的附件3中規(guī)定“穩(wěn)定性研究資料包括至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究資料，并應(yīng)當(dāng)充分考慮產(chǎn)品在儲(chǔ)存、運(yùn)輸和使用過(guò)程中的不利條件，進(jìn)行相應(yīng)的穩(wěn)定性研究。應(yīng)當(dāng)詳細(xì)說(shuō)明穩(wěn)定性研究方法的確定依據(jù)及具體試驗(yàn)方法、過(guò)程”。上述規(guī)定是體外診斷試劑產(chǎn)品注冊(cè)資料中穩(wěn)定性研究部分的審評(píng)依據(jù)，規(guī)定了穩(wěn)定性研究的要求、批次和條件等，但對(duì)具體的研究方法及內(nèi)容并未進(jìn)行詳細(xì)規(guī)定，現(xiàn)參考《生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》和美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）發(fā)布的指南性文件EP25-A，介紹體外診斷試劑產(chǎn)品穩(wěn)定性研究的基本內(nèi)容及注意事項(xiàng)。
1.國(guó)內(nèi)體外診斷試劑穩(wěn)定性研究現(xiàn)狀
目前大部分企業(yè)在研發(fā)過(guò)程中已開(kāi)始重視穩(wěn)定性研究?jī)?nèi)容，但有些企業(yè)在產(chǎn)品注冊(cè)過(guò)程中提交的穩(wěn)定性研究資料中仍然存在許多問(wèn)題。如：
①企業(yè)將研究重點(diǎn)放在效期穩(wěn)定性和加速穩(wěn)定性研究上，忽視了產(chǎn)品開(kāi)封穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性和試劑中所含質(zhì)控品、校準(zhǔn)品穩(wěn)定性的研究
②企業(yè)對(duì)產(chǎn)品穩(wěn)定性考察項(xiàng)目不同，有的企業(yè)只考察試劑最后的化學(xué)、生物性能是否符合要求，而有的企業(yè)則增加了對(duì)試劑物理性能的考察，如外觀、裝量、移行速度等；
③效期穩(wěn)定性研究中，有的企業(yè)是研究在規(guī)定儲(chǔ)存條件下保存至有效期末的產(chǎn)品，有的企業(yè)是研究在規(guī)定儲(chǔ)存條件下保存至有效期后1、2個(gè)月乃至半年的產(chǎn)品；
④在對(duì)產(chǎn)品運(yùn)輸穩(wěn)定性項(xiàng)目的研究中，相同品種在不同生產(chǎn)企業(yè)的研究項(xiàng)目中模擬運(yùn)輸條件差別很大；
⑤產(chǎn)品含校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的穩(wěn)定性研究中，有的企業(yè)只考察了校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的“準(zhǔn)確度”項(xiàng)目，而忽視了“均一性”等項(xiàng)目的考察；
⑥在制定產(chǎn)品有效期時(shí)，大部分企業(yè)依據(jù)的是產(chǎn)品效期穩(wěn)定性研究資料，少部分企業(yè)依據(jù)的是產(chǎn)品加速穩(wěn)定性研究資料；
⑦僅進(jìn)行了一批產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究工作，未按法規(guī)要求進(jìn)行三批產(chǎn)品的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)；
⑧部分企業(yè)因?qū)嶋H生產(chǎn)樣品在注冊(cè)申報(bào)時(shí)留樣時(shí)限較短，故采用前期實(shí)驗(yàn)室研發(fā)過(guò)程中的樣品代替實(shí)際生產(chǎn)樣品來(lái)考察產(chǎn)品穩(wěn)定性；
⑨穩(wěn)定性研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果的描述過(guò)于籠統(tǒng)，如使用“CV值小于10%”“符合產(chǎn)品技術(shù)要求規(guī)定”等語(yǔ)句表示，應(yīng)根據(jù)實(shí)測(cè)結(jié)果提供具體檢測(cè)數(shù)據(jù)；
⑩只提供穩(wěn)定性考察期末的研究數(shù)據(jù)，未提供穩(wěn)定性考察過(guò)程中不同時(shí)間段的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)；
?不同企業(yè)對(duì)同一類(lèi)產(chǎn)品的有效期要求不一致，如糖化血紅蛋白檢測(cè)類(lèi)產(chǎn)品的有效期6~36個(gè)月不等。
2.穩(wěn)定性研究的方案
2.1穩(wěn)定性研究目的
穩(wěn)定性作為體外診斷試劑保持產(chǎn)品安全有效的重要指標(biāo)，對(duì)產(chǎn)品的生產(chǎn)、運(yùn)輸、保存和使用等環(huán)節(jié)具有重要的指導(dǎo)意義。體外診斷試劑本身就是生物試劑，一些活性基團(tuán)會(huì)有不同的化學(xué)不穩(wěn)定性趨向，容易發(fā)生水解、酶解和氧化等反應(yīng)，從而影響到試劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性。如含有多肽類(lèi)的凍干粉試劑，其儲(chǔ)存環(huán)境中的含水量和含氧量對(duì)試劑穩(wěn)定性的影響非常大。
因此，穩(wěn)定性研究的目的包括：①確定產(chǎn)品的運(yùn)輸、儲(chǔ)存和開(kāi)封后的保存條件；②確定產(chǎn)品的保存期限和開(kāi)封后保存期限；③產(chǎn)品儲(chǔ)存條件和保存期限等發(fā)生變更時(shí)，驗(yàn)證變更后的產(chǎn)品穩(wěn)定性；④根據(jù)穩(wěn)定性研究結(jié)果，評(píng)價(jià)和調(diào)整產(chǎn)品組方、工藝、包裝材料等。如某體外診斷試劑產(chǎn)品穩(wěn)定性研究目的：為考察試劑盒的穩(wěn)定性，對(duì)三批產(chǎn)品進(jìn)行儲(chǔ)存溫度2~8?C的穩(wěn)定性試驗(yàn)、37?C的加速穩(wěn)定性試驗(yàn)、2~8?C的開(kāi)瓶穩(wěn)定性試驗(yàn)、模擬運(yùn)輸穩(wěn)定性試驗(yàn)等，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果確定產(chǎn)品的有效期、開(kāi)封有效期并確定試劑盒的運(yùn)輸條件。
2.2穩(wěn)定性研究的材料
穩(wěn)定性研究的材料包括試驗(yàn)儀器、試驗(yàn)試劑（3批）、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品等。穩(wěn)定性研究中的試驗(yàn)儀器應(yīng)為產(chǎn)品的適用機(jī)型。除試驗(yàn)儀器外，穩(wěn)定性研究中還會(huì)用到恒溫箱、冷藏柜、恒濕箱等儀器，上述儀器應(yīng)定期檢查，防止因?yàn)閮x器的故障導(dǎo)致穩(wěn)定性試驗(yàn)失敗。試驗(yàn)試劑應(yīng)為實(shí)際生產(chǎn)條件下的三批試劑，并分別說(shuō)明三個(gè)批次的批號(hào)，三個(gè)批次的生產(chǎn)工藝與質(zhì)量要求均應(yīng)保持一致。試劑的包裝材料應(yīng)與實(shí)際儲(chǔ)存采用的包裝材料一致。質(zhì)控品、校準(zhǔn)品等應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求中的相關(guān)要求。
2.3穩(wěn)定性研究的項(xiàng)目
穩(wěn)定性研究的項(xiàng)目應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品組成和方法學(xué)原理來(lái)選擇評(píng)價(jià)產(chǎn)品質(zhì)量和有效性的項(xiàng)目。一般選擇產(chǎn)品技術(shù)要求中規(guī)定的項(xiàng)目，如最低檢測(cè)限、準(zhǔn)確性、重復(fù)性、線性范圍、特異性、陰/陽(yáng)性參考品符合率等。如果穩(wěn)定性研究結(jié)果出現(xiàn)不符合研究方案中確定的評(píng)價(jià)指標(biāo)的情況時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步分析原因。導(dǎo)致產(chǎn)品不穩(wěn)定的原因可能是組分不穩(wěn)定、包裝材料破損或者儲(chǔ)存、運(yùn)輸條件變化等因素，企業(yè)應(yīng)在確定原因后采取改進(jìn)措施，并在改進(jìn)之后對(duì)產(chǎn)品重新進(jìn)行穩(wěn)定性研究。
3.穩(wěn)定性研究方法
3.1 效期穩(wěn)定性評(píng)價(jià)
效期穩(wěn)定性評(píng)價(jià)即實(shí)時(shí)穩(wěn)定性評(píng)價(jià)，是將體外診斷試劑置于制造商規(guī)定的條件下建立或驗(yàn)證試劑保存期的試驗(yàn)。根據(jù)生物制品穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則要求，生物制品效期穩(wěn)定性研究時(shí)間設(shè)定一般原則是“第一年內(nèi)每隔三個(gè)月檢測(cè)一次，第二年內(nèi)每隔六個(gè)月檢測(cè)一次，第三年開(kāi)始可以每年檢測(cè)一次。如果有效期為一年或一年以?xún)?nèi)，則長(zhǎng)期穩(wěn)定性應(yīng)為前三個(gè)月每月檢測(cè)一次，以后每三個(gè)月一次”。體外診斷試劑可根據(jù)產(chǎn)品具體情況來(lái)確定考察時(shí)間，對(duì)于產(chǎn)品性能可能會(huì)發(fā)生變化的時(shí)段應(yīng)進(jìn)行密集檢測(cè)。體外診斷試劑產(chǎn)品提交注冊(cè)申請(qǐng)前的注冊(cè)檢驗(yàn)和臨床試驗(yàn)時(shí)間可以一并計(jì)入產(chǎn)品穩(wěn)定性研究時(shí)限中。如某體外診斷試劑（效期穩(wěn)定性定為1年）穩(wěn)定性研究方法為將三個(gè)批號(hào)的試劑盒放入2~8?C的冷藏柜中，自放置之日起分別在0、1、2、3、6、9、12、13個(gè)月時(shí)各取原裝未開(kāi)封試劑，參考產(chǎn)品技術(shù)要求中相關(guān)檢測(cè)方法對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，各指標(biāo)均應(yīng)符合擬定的技術(shù)要求中各性能指標(biāo)要求。
3.2 加速穩(wěn)定性評(píng)價(jià)
加速穩(wěn)定性評(píng)價(jià)是通過(guò)設(shè)定溫度、濕度、光或振動(dòng)等極端條件考察體外診斷試劑的產(chǎn)品各項(xiàng)物理、化學(xué)、生物性能，從而推斷體外診斷試劑有效期的研究。由于大部分診斷試劑中主要組分為蛋白類(lèi)物質(zhì)，在進(jìn)行加速穩(wěn)定性研究中，升高溫度來(lái)考察試劑穩(wěn)定性成為常用的方式，通常是在長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究溫度條件下至少升高15?C。如某試劑（效期穩(wěn)定性定為1年。
加速穩(wěn)定性研究方法為：將三個(gè)批號(hào)的試劑盒放入37?C恒溫培養(yǎng)箱中，分別于第0、3、6、10天各取原裝未開(kāi)封試劑，參考產(chǎn)品技術(shù)要求中相關(guān)檢測(cè)方法對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，各指標(biāo)均應(yīng)符合擬定的技術(shù)要求中各性能指標(biāo)要求。目前，有企業(yè)認(rèn)為，試劑在37?C放置3d相當(dāng)于4?C放置半年，37?C放置7d相當(dāng)于4?C放置1年，還有企業(yè)認(rèn)為半年的加速穩(wěn)定性研究后可以將產(chǎn)品效期穩(wěn)定性定為2年，這些說(shuō)法是缺乏科學(xué)依據(jù)的。由于體外診斷試劑結(jié)構(gòu)組成比較復(fù)雜，可能同時(shí)存在多種降解途徑，不同條件下的降解、聚合、變性、失活，以及與包裝材料之間的相互作用等各不相同，所以一般情況下，加速穩(wěn)定性研究只能用于產(chǎn)品一般性能研究，不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期。
3.3 運(yùn)輸穩(wěn)定性評(píng)價(jià)
運(yùn)輸穩(wěn)定性評(píng)價(jià)是基于對(duì)試劑實(shí)際運(yùn)輸條件的了解（如運(yùn)輸時(shí)間、預(yù)計(jì)溫度和濕度）來(lái)模擬運(yùn)輸條件存放產(chǎn)品從而評(píng)價(jià)產(chǎn)品的穩(wěn)定性。運(yùn)輸穩(wěn)定性的研究應(yīng)遵守目前監(jiān)管部門(mén)對(duì)體外診斷試劑冷鏈運(yùn)輸管理的有關(guān)法規(guī)要求。在運(yùn)輸穩(wěn)定性考察中主要考慮的條件有：極端溫度條件，溫度循環(huán)條件，沖擊與振蕩，壓力與濕度等。生產(chǎn)企業(yè)可以通過(guò)實(shí)地追蹤記錄體外診斷試劑產(chǎn)品的物流運(yùn)輸情況為模擬運(yùn)輸模式的確定提供參考。如某檢測(cè)試劑盒模擬運(yùn)輸穩(wěn)定性研究方法為，將三批試劑盒放在高溫37?C時(shí)存放3d，再?gòu)?.5m高度，讓試劑盒自由落體跌落，反復(fù)3次，進(jìn)行震蕩跌落試驗(yàn)，觀察試劑盒外包裝、內(nèi)包裝等有無(wú)破損后，參考產(chǎn)品技術(shù)要求中相關(guān)檢測(cè)方法對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，各指標(biāo)均應(yīng)符合擬定的技術(shù)要求中各性能指標(biāo)要求。
3.4 開(kāi)封穩(wěn)定性
即開(kāi)瓶穩(wěn)定性，是考察試劑在正常使用條件下，外界因素對(duì)試劑性能指標(biāo)的影響。由于試劑、試紙條等在開(kāi)封后會(huì)與空氣接觸產(chǎn)生氧化、降解等反應(yīng)，部分試劑在開(kāi)瓶上機(jī)后的外界條件與原儲(chǔ)存條件差別很大，以及部分試劑還會(huì)存在使用者二次配制等情況，所以在制定開(kāi)封穩(wěn)定性研究方法時(shí)應(yīng)充分考慮到各種環(huán)境因素。如果試劑中含有堿性物質(zhì)時(shí)，開(kāi)瓶后長(zhǎng)期放在生化分析儀中，空氣中的二氧化碳會(huì)與試劑中的堿性成分反應(yīng)，從而影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。因此對(duì)上述試劑，每次使用之后應(yīng)蓋緊瓶蓋，避免接觸空氣。生化分析儀的試劑盤(pán)的溫度范圍一般為5~15?C，因此，當(dāng)試劑中含有對(duì)溫度敏感的組分時(shí)，試劑使用后應(yīng)立刻放回2~8?C冰箱中儲(chǔ)存，并盡快使用。通常試劑開(kāi)瓶7d后，檢測(cè)前應(yīng)重新校準(zhǔn)，以提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。如某試劑盒開(kāi)封穩(wěn)定性研方法為：開(kāi)啟三個(gè)批號(hào)的試劑盒放入2~8?C的冷藏柜中保存30d，自放置之日起分別在0、15、30、45d時(shí)取樣，每次取樣后擰緊瓶蓋并放回2~8?C保存，參考產(chǎn)品技術(shù)要求中的線性、準(zhǔn)確度、精密度、最低檢測(cè)限等檢測(cè)方法對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，各指標(biāo)均應(yīng)符合擬定的技術(shù)要求中各性能指標(biāo)要求。
4.穩(wěn)定性研究結(jié)果分析
穩(wěn)定性研究是體外診斷試劑產(chǎn)品質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要部分，穩(wěn)定性研究結(jié)果應(yīng)符合穩(wěn)定性研究方案中設(shè)定的結(jié)果可接受范圍。企業(yè)應(yīng)對(duì)不同批次的產(chǎn)品的研究結(jié)果進(jìn)行一致性分析，以驗(yàn)證產(chǎn)品是否存在批間差異。同時(shí)應(yīng)在考察期末對(duì)同一批次產(chǎn)品在不同時(shí)期的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行變異分析，考察其性能隨時(shí)間下降的趨勢(shì)，最后根據(jù)研究方案中設(shè)定的可接受結(jié)果范圍確定產(chǎn)品的儲(chǔ)存條件和有效期。
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